Проба троммера на глюкозу реакция

Проба троммера на глюкозу реакция

Реакция Троммера

Эта реакция основана на восстанавливающих свойствах свободных карбонильных групп сахаров. Такие группы имеются у всех моносахаридов, у большинства дисахаридов (например, мальтозы, лактозы, целлобиозы) и трисахаридов. В щелочной среде эти сахара восстанавливают металлы из окисной формы в закисную.

Такие дисахариды, как сахароза, в которых обе карбонильные группы связаны, а также полисахариды этой реакции не дают.

При реакции Троммера происходит восстановление окиси меди в закись. Для проведения этой реакции используется медный купорос и гидроокись натрия, которые при взаимодействии образуют гидрат окиси меди, вступающий в реакцию с сахарами:

При нагревании голубой гидрат окиси меди восстанавливается сахарами в желтый гидрат закиси меди:

Гидрат закиси меди при дальнейшем нагревании, теряя воду, переходит в красную закись меди, выпадающую в виде кристаллов:

Применение медного купороса и щелочи в этой реакции может привести к нежелательному образованию побочных продуктов, так как если сахара недостаточно, чтобы восстановить весь образовавшийся гидрат окиси меди, то его избыток разлагается (под действием нагревания) на окись меди и воду. Черные кристаллы окиси меди маскируют реакцию.

Этого недостатка реакции Троммера можно избежать, используя в качестве реактива фелингову жидкость, в которой ион двухвалентной меди находится в комплексном соединении с виннокислой солью (сегнетова соль).

1) 7%-ный раствор медного купороса.

2) 50%-ный раствор гидроокиси натрия или гидроокиси калия,

3) Фелингова жидкость.

Приготовление фелинговой жидкости. Раствор А: 20 г сегнетовой солю и 15 г гидроокиси натрия или гидроокиси калия растворить в 100 мл воды. Раствор Б: 4 г медного купороса растворить в 100 мл воды. Перед употреблением слить растворы А и Б в равных объемах (можно на предметном стекле).

Проведение реакции Троммера с медным купоросом и едкой щелочью

1. Поместить срез в 7%-ный раствор медного купороса на 1-5 мин (в часовом стекле).

2. Быстро ополоснуть водой.

3. Перенести срез на предметное стекло в кипящую каплю 50%-ного раствора гидроокиси натрия (или калия) и накрыть покровным стеклом.

4. Наблюдать появление коричнево-красных кристаллов закиси меди.

Проведение реакции Троммера с фелинговой жидкостью

1. Поместить срез в фелингову жидкость на предметное стекло и накрыть покровным стеклом.

2. Осторожно подогреть.

3. Наблюдать выпадение кристаллов закиси меди.

Результаты реакции (табл. 1)

Обе модификации этой реакции дают аналогичные результаты. В присутствии восстанавливающих сахаров появляются коричнево-красные кристаллы закиси меди.

После длительного кипячения дисахарид сахароза, гидролизуясь, превращается в моносахарид, и реакция начинается снова.

Препарат следует рассматривать в отраженном свете, так как выпавшие кристаллы непрозрачны.

При любом увеличении микроскопа видно, что эпидермис, паренхимные клетки листа капусты, а также живые клетки проводящих пучков забиты коричневыми кристаллами закиси меди. Так как клеточный сок, содержащий сахара, вытекает из разрезанных клеток, то кристаллы закиси меди легко перемещаются из одной клетки в другую, препятствуя установлению истинной локализации сахара. Однако, по-видимому, кристаллов в паренхиме пучков, флоэме и камбии несколько меньше, чем в паренхиме листа, где клетки особенно богаты клеточным соком.

Реакция с фенилгидразином (озазоновая) по Э. Фишеру

Преимуществом этой реакции по сравнению с вышеописанными является то, что она позволяет более точно установить локализацию сахара и, кроме того, различить вид сахара.

Определение основано на образовании кристаллов озазона при взаимодействии уксуснокислого фенилгидразина с моносахаридами. Уксуснокислый фенилгидразин получается при взаимодействии солянокислого фенилгидразина с уксуснокислым натрием. Реакция с уксуснокислым фенилгидразином протекает так:

Сахароза, предварительно превращенная в моносахарид нагреванием в глицерине, также дает эту реакцию.

Готовят два препарата из одного и того же материала. Чтобы отличить моносахариды от дисахаридов, один препарат оставляют при комнатной температуре, другой подогревают на водяной бане.

Если кристаллы озазона выпадают при 10-минутном подогревании или без подогревания в течение нескольких часов (дней), следовательно, в препаратах присутствуют моносахариды. При этом в течение первого часа реагирует фруктоза, глюкоза выявляется через несколько дней.

При более длительном нагревании препарата (около полутора часов) под воздействием глицерина происходит расщепление сахарозы на моносахара. Усиление реакции в этом случае указывает на присутствие сахарозы.

Форма выпадающих кристаллов озазона зависит от вида сахара, а также от условий реакции. При комнатной температуре озазон выпадает обычно в виде мелких сферокристаллов. При нагревании появляются золотисто-желтые игольчатые кристаллы, собранные в пучки, снопики, звезды, а также мелкие сферокристаллы.

Перед проведением реакции реактивы смешать в равных объемах (можно на предметном стекле). При приготовлении растворов оба вещества измельчить в порошок и растворить в глицерине на водяной бане в течение 1 ч. Реактивы хранить в темных склянках и в темноте.

1. На предметное стекло нанести каплю солянокислого фенилгидразина и добавить к ней каплю уксуснокислого натрия.

Читайте также:  От чего человек теряет сознания при сахарном диабете

2. Поместить срез в реактив и накрыть покровным стеклом.

3. Один препарат оставить на холоде, другой поместить на водяную баню.

4. Наблюдать выпадение кристаллов озазона.

Результаты реакции (табл. 2, 3)

Без подогревания в листе капусты на 3-й день выпадают довольно мелкие сферокристаллы. Иногда их кристаллическая природа едва заметна и они имеют вид золотистых глыбок неправильной формы, например, при выпадении в мелких клетках пучка. Выпадение кристаллов без подогревания свидетельствует о наличии глюкозы во всех живых клетках листа капусты.

При кратковременном нагревании препарата также выпадают сферокристаллы и мелкие игольчатые кристаллы. После длительного нагревания количество выпадающих кристаллов увеличивается за счет сахарозы. Иногда удается обнаружить картины постепенного укрупнения сферокристаллов и перекристаллизации их в игольчатую форму. Размеры игольчатых кристаллов могут во много раз превышать диаметр клетки.

Разнообразие формы и размеров кристаллов озазона объясняется, по-видимому, трудностью создания совершенно одинаковых условий протекания реакции.

Таким образом, лист капусты содержит как моносахариды, так и дисахариды.

Источник

Лабораторная работа № 5 Свойства углеводов

Опыт 1. Реакция серебряного зеркала – это реакция восстановления серебра из аммиачного раствора оксида серебра (реактив Толленса).

В водном растворе аммиака оксид серебра растворяется с образованием комплексного соединения — гидроксид диамминсеребра(I) [Ag(NH3)2]OH

при добавлении к которому альдегида происходит окислительно-восстановительная реакция с образованием металлического серебра:

Если реакция проводится в сосуде с чистыми и гладкими стенками, то серебро выпадает в виде тонкой плёнки, образуя зеркальную поверхность.

При наличии малейших загрязнений серебро выделяется в виде серого рыхлого осадка.

Реакция «серебряного зеркала» может использоваться как качественная реакция на альдегиды. Так, реакцию «серебряного зеркала» можно использовать как отличительную между глюкозой и фруктозой. Глюкоза относится к альдозам (содержит альдегидную группу в открытой форме), а фруктоза — к кетозам (содержащие кетогруппу в открытой форме). Поэтому глюкоза дает реакцию «серебряного зеркала», а фруктоза – нет. Но если в растворе присутствует щелочная среда, то кетозы изомеризуются в альдозы и также дают положительные реакции с аммиачным раствором оксида серебра (реактив Толленса).

Качественная реакция глюкозы с аммиачным раствором оксида серебра. Доказать наличие альдегидной группы в глюкозе можно с помощью аммиачного раствора оксида серебра. К аммиачному раствору оксида серебра добавим раствор глюкозы и подогреем смесь на водяной бане. Вскоре на стенках колбы начинает осаждаться металлическое серебро. Эта реакция называется реакцией серебряного зеркала. Ее используют как качественную для открытия альдегидов. Альдегидная группа глюкозы окисляется до карбоксильной группы. Глюкоза превращается в глюконовую кислоту.

Порядок выполнения работы.

В две пробирки наливают по 2 мл. аммиачного раствора оксида серебра. В одну из них добавляют 2 мл. 1%-ного раствора глюкозы, в другую – фруктозы. Обе пробирки кипятят.

Амиачный раствор гидрата окиси серебра получают при взаимодействии нитрата серебра с гидроксидом натрия и гидроксидом аммония:

AgNO3+ NaOH → AgOH↓+ NaNO3,

AgOH + 2 NH4 OH→[ Ag(NH3)2] OH + H2O,

[Ag(NH3)2] OH + 3 H2→ Ag2O + 4 NH4 OH.

Принцип метода. На стенках пробирки с глюкозой образуется зеркало в результате выделения металлического серебра.

Оформление работы: Написать вывод, а также ход и уравнения реакции в тетрадь.

Опыт 2. Реакция Фелинга.

Принцип метода. В пробирке с глюкозой появляется кирпично-красное окрашивание от образующегося оксида меди (I).

По мере нагревания интенсивно-синий цвет реактива Фелинга изменяется. Первоначально появляется жёлтый осадок гидрата закиси меди, который постепенно переходит в закись меди и выпадает на дно пробирки в виде ярко-красного осадка. Находившаяся в растворе глюкоза полностью окисляется до глюконовой кислоты за счёт кислорода гидрата окиси меди.

Глюкоза Глюконовая кислота

Реакция взаимодействия глюкозы с реактивом Фелинга

2CuOHH2O+Cu2O

Порядок выполнения работы.

В две пробирки наливают: а) 2 мл. 1%-ного раствора глюкозы, б) 2 мл. 1%-ного раствора фруктозы. В обе пробирки добавляют по 1 мл реактива Фелинга, представляющего собой щелочной раствор комплексного соединения сульфата меди (II) с виннокислым калий-натрием в 10%-ном р-ре NaOH. Готовят непосредственно перед употреблением. Обе пробирки нагревают до кипения.

Оформление работы: написать вывод, а также ход и уравнения реакции в тетрадь.

Опыт 3. Качественная реакция на фруктозу

Принцип метода. При нагревании пробы с фруктозой в присутствии резорцина и соляной кислоты до 80 о С через некоторое время в пробирке с фруктозой появляется ярко-красное окрашивание.

При нагревании пробы с фруктозой в присутствии резорцина и соляной кислоты появляется вишнево-красное окрашивание. Проба также применима для обнаружения других кетоз. Альдозы в этих же условиях взаимодействуют медленнее и дают бледно-розовую окраску или вообще не взаимодействуют. Открыта Ф. Ф. Селивановым в 1887 году. Применяется при анализе мочи. Проба положительная при фруктозурии обменного или транспортного генеза. В 13 % случаев проба положительная при пищевой нагрузке фруктами и мёдом. Хим. формула фруктозы – C6H12O6

Циклическая формула фруктозы​

R- осататок Окрашенное соединенue

Читайте также:  С чем можно дифференцировать сахарный диабет

Порядок выполнения работы.

В две пробирки наливают по 2 мл: в одну – 1%-ный раствор глюкозы, в другую – 1%-ный раствор фруктозы. В обе пробирки вносят по 2 мл реактива Селиванова: 0,05 г резорцина растворяют в 100 мл 20 %-ной соляной кислоты. Обе пробирки осторожно нагревают до 80 о С (до начала кипения). Появляется красное окрашивание.

Выводы: результаты опыта и уравнение реакции записывают в тетрадь.

Опыт 4. Качественная реакция на молочную кислоту

Принцип метода. Молочная кислота образуется при анаэробном окислении углеводов, появляется в желудочном соке с низким содержанием соляной кислоты или при полном ее отсутствии. Появление молочной кислоты в моче обычно наблюдается после тренировок, включающих упражнения субмаксимальной мощности. Каждое такое упражнение приводит к резкому возрастанию концентрации лактата в крови и последующему его переходу из кровяного русла в мочу. Обнаружить её можно с помощью реактива Уфельмана. Его готовят прибавляя по каплям 1% раствор хлорного железа к 2% раствору фенола до появления фиолетовой окраски. Раствор молочной кислоты (С ₃Н ₆О₃ или СН ₃—СН(ОН)—СООН)в присутствии реактива Уфельмана приобретает желто-зеленую окраску вследствие образования лактата железа.

фенол хлорное железо образуется трихлоридфенолят железа

а) Взаимодействие фенола с хлоридом железа

 трихлоридфенолят железа фенол 

лактат лактат железа

б)Взаимодействие лактата стрихлоридфенолятом железа

Порядок выполнения работы.

В пробирку наливают 1 мл реактива Уфельмана и добавляют 0,5 мл раствора, содержащего молочную кислоту. Фиксируют изменение окраски.

Выводы: результаты опыта и уравнение реакции записывают в тетрадь.

Опыт 5. Реакция Троммера на моносахариды.

Принцип метода. В щелочной среде альдозы и некоторые дисахариды, имеющие потенциально свободную альдегидную группу или свободный гликозидный гидроксил окисляются до альдоновых кислот, одновременно восстанавливая медь(II) в медь(I). В данной реакции, образовавшийся вследствие взаимодействия NaOH и CuSO4 гидроксид меди(II) [имеет синюю окраску], восстанавливается до гидроксида меди(I) [желтая окраска], который далее распадается до Cu2 O [красная окраска закиси меди].

2NaOH + CuSO4→ Cu(OH)2↓+ Na2SO4

Глюкоза + 2Cu(OH)2глюконовая к-та + 2CuOH + 2H2O

глюкоза глюконовая к-та

Порядок выполнения работы.

В пробирку наливают раствор глюкозы и 6-8 капель 2н NaOH. Затем по каплям добавляют 0,2 н раствор CuSO4 до образования нерастворимого голубого осадка. Осторожно нагревают пробирку на спиртовке. Голубой, не растворимый в воде осадок гидрата окиси меди (II) постепенно переходит в желтый, а затем в красный осадок закиси меди (I). Это указывает на положительную реакцию Троммера.

Избыток медной соли маскирует реакцию, так как гидроокись меди (II) при нагревании теряет воду и дает черный оксид меди (II).

Выводы: результаты опыта и уравнение реакции записывают в тетрадь.

Опыт 6. Реакция Барфеда

Принцип метода. Молекулы дисахаридов состоят из остатков двух молекул моносахаридов, соединенных гликозидной связью. К дисахаридам относятся: сахароза (свекловичный или тростниковый сахар), мальтоза (солодовый сахар), лактоза (молочный сахар), трегалоза (грибной сахар, микоза), целлобиоза (дисахарид, освобождающийся при гидролитическом расщеплении клетчатки) и др.

По типу связи между молекулами моноз дисахариды можно разделить на две группы: 1) построенные по типу мальтозы; 2) типа трегалозы.

Дисахариды мальтозного типа состоят из двух остатков моноз, соединенных в положении 1,4, т. е. кислородный мостик связывает первый атом углерода одной молекулы моносахарида с четвертым атомом углерода другой.

У мальтозы остается свободным один гликозидный гидроксил (карбонильная группа), поэтому дисахариды, построенные по типу мальтозы, сохраняют все реакции, свойственные карбонильной группе (Троммера, Бенедикта, Ниландера, с фелинговой жидкостью и т. д.).

По мальтозному тйпу построены также лактоза и целлобиоза. При гидролизе лактозы освобождаются молекула а-глюкозы и молекула галактозы

В молекулах дисахаридов, построенных по типу трегалозы, моносахариды соединены кислородным мостиком между двумя гликозидными гидроксилами (карбонильными группами). Поэтому дисахариды трегалозного типа лишены восстанавливающих свойств. К дисахаридам указанного типа относятся сахароза и трегалоза. Сахароза легко гидролизуется с образованием смеси равных количеств глюкозы и фруктозы, называемой инвертным сахаром. Инвертный сахар дает все реакции, характерные для моноз.

Реакция Барфеда позволяет быстро отличить моносахариды от дисахаридов мальтозного типа, обладающих, как известно, восстанавливающими свойствами (лактозы, мальтозы, целлобиозы). Она основана на том, что восстанавливающие свойства моносахаридов сохраняются также в кислой среде, тогда как дисахариды восстанавливают металлы только при щелочной реакции. При взаимодействии дисахаридов с реактивом Барфеда красный осадок закиси меди появляется не сразу, а лишь спустя некоторое время (15—20 мин.), когда произойдет их гидролитический распад, который катализируется кислотами.

Порядок выполнения работы.

Отличие восстанавливающих свойств дисахаридов от моносахаридов.

Следует избегать длительного кипячения, т.к. дисахариды в кислой среде могут гидролизоваться до моносахаридов, и в результате реакция Барфеда станет положительной. Проба Барфеда отличается от других реакций восстановления тем, что окисление сахара протекает не в щелочной среде (где окисление протекает значительно легче, чем в нейтральной и особенно в кислой), а в среде слабо кислой. В этих условиях дисахариды практически не окисляются, что позволяет их отличить от моносахаридов.

Читайте также:  Официальный сайт для больных сахарным диабетом

Источник

Глюкозотолерантный тест (стандартный)

Пероральный глюкозотолерантный тест заключается в определении уровня глюкозы плазмы крови натощак и через 2 часа после углеводной нагрузки в целях диагностики различных нарушений углеводного обмена (сахарного диабета, нарушения толерантности к глюкозе, гликемии натощак).

Результаты исследований выдаются с бесплатным комментарием врача.

Пероральный глюкозотолерантный тест (ПГТТ), тест на толерантность к глюкозе, проба с 75 граммами глюкозы.

Синонимы английские

Glucose tolerance test (GTT), oral glucose tolerance test ( О GTT).

Ферментативный УФ метод (гексокиназный).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Пероральный глюкозотолерантный тест следует проводить утром на фоне не менее чем 3-дневного неограниченного питания (более 150 г углеводов в сутки) и обычной физической активности. Тесту должно предшествовать ночное голодание в течение 8-14 часов (можно пить воду). Последний вечерний прием пищи должен содержать 30-50 г углеводов. Ночью перед тестом и до его окончания не курить. После взятия крови натощак испытуемый должен не более чем за 5 минут выпить 75 г безводной глюкозы или 82,5 г моногидрата глюкозы, растворенных в 250-300 мл воды. Для детей нагрузка составляет 1,75 г безводной глюкозы (или 1,925 г моногидрата глюкозы) на кг массы тела, но не более 75 г (82,5 г), при массе ребенка 43 кг и выше дается обычная доза (75 г). В процессе теста не разрешается курение и активная физическая нагрузка. Через 2 часа осуществляется повторное взятие крови.

Следует помнить, что если уровень глюкозы крови натощак превышает 7,0 ммоль/л, то пероральный глюкозотолерантный тест не выполняется, так как такой уровень глюкозы крови сам по себе является одним из критериев постановки диагноза «сахарный диабет».

Пероральный глюкозотолерантный тест позволяет диагностировать различные нарушения углеводного обмена, такие как сахарный диабет, нарушения толерантности к глюкозе, гликемия натощак, но не может позволить уточнить тип и причины развития сахарного диабета, в связи с чем после получения любого результата перорального глюкозотолерантного теста целесообразно провести обязательную консультацию эндокринолога.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Когда целесообразно выполнять пероральный глюкозотолерантный тест в целях скрининга нарушений углеводного обмена

Источник

Глюкозотолерантный тест (расширенный)

Пероральный глюкозотолерантный тест (расширенный) заключается в определении уровня глюкозы плазмы крови натощак и каждые 30 минут (30, 60, 90, 120 минут) после углеводной нагрузки в целях диагностики различных нарушений углеводного обмена (сахарного диабета, нарушения толерантности к глюкозе, гликемии натощак).

Результаты исследований выдаются с бесплатным комментарием врача.

Пероральный глюкозотолерантный тест (ПГТТ), тест на толерантность к глюкозе, проба с 75 граммами глюкозы.

Синонимы английские

Glucose tolerance test (GTT), oral glucose tolerance test ( О GTT).

Ферментативный УФ-метод (гексокиназный).

Ммоль/л (миллимоль на литр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Общая информация об исследовании

Пероральный глюкозотолерантный тест следует проводить утром на фоне не менее чем 3-дневного неограниченного питания (более 150 г углеводов в сутки) и обычной физической активности. Тесту должно предшествовать ночное голодание в течение 8-14 часов (можно пить воду). Последний вечерний прием пищи должен содержать 30-50 г углеводов. Ночью перед тестом и до его окончания не курить. После взятия крови натощак испытуемый должен не более чем за 5 мин. выпить 75 г безводной глюкозы или 82,5 г моногидрата глюкозы, растворенных в 250-300 мл воды. Для детей нагрузка составляет 1,75 г безводной глюкозы (или 1,925 г моногидрата глюкозы) на кг массы тела, но не более 75 г (82,5 г), при массе ребенка 43 кг и выше дается обычная доза (75 г). В процессе теста не разрешается курение и активная физическая нагрузка. Взятие крови производится каждые 30 минут (30, 60, 90, 120 минут) с определением гипергликемического и постгликемического коэффициента.

Следует помнить, что если уровень глюкозы крови натощак превышает 7,0 ммоль/л, то пероральный глюкозотолерантный тест не выполняется, так как такой уровень глюкозы крови сам по себе является одним из критериев постановки диагноза «сахарный диабет».

Пероральный глюкозотолерантный тест позволяет диагностировать различные нарушения углеводного обмена, такие как сахарный диабет, нарушения толерантности к глюкозе, гликемия натощак, но не может позволить уточнить тип и причины развития сахарного диабета, в связи с чем после получения любого результата перорального глюкозотолерантного теста целесообразно провести обязательную консультацию эндокринолога.

Отличительной особенностью 11 Глюкозотолерантного теста (расширенного) от 06-258 Глюкозотолерантного теста (стандартного) является его выполнение не по двум, а по пяти точкам (натощак и каждые 30 минут: 30, 60, 90, 120 минут) с определением гипергликемического и постгликемического коэффициента.

Для чего используется исследование?

Когда назначается исследование?

Когда целесообразно выполнять пероральный глюкозотолерантный тест в целях скрининга нарушений углеводного обмена

Источник

Мои рекомендации
Adblock
detector